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博士生预答辩报告公示-彭坤-201611210101

发布时间:2020-02-29 09:55:43

报告题目:Steap家族在肠脑轴巨噬细胞中的调控机制

报告简介:

通过构建肠-视网膜间的免疫-神经损伤模型,明确肠炎引起的视网膜损伤表型,探究肠-视网膜相关疾病可能的免疫机制,特别是Macrophage/Microglia在肠-视网膜相关疾病中的重要作用,进一步研究STEAP蛋白对Macrophage/Microglia增殖活化的影响,从而揭示Steaps调控的Macrophage/Microglia在肠-视网膜损伤中的免疫调节机制,为肠脑轴相关疾病的免疫机制探索提供参考。

在本研究中,首先,我们成功构建了DSS诱导的慢性结肠炎小鼠模型,既往研究已经发现,炎症性肠病的患者存在眼部病变。本研究发现,结肠炎小鼠视网膜电图的a,b 波振幅都出现了不同程度的下降,振荡电位也显著降低,b波出现明显的反应延迟,这些都提示,DSS诱导的结肠炎小鼠的视网膜功能可能存在异常,特别是b波所反应的视网膜内层神经元的功能。进一步分析结肠炎小鼠视网膜的结构,HE结果显示,结肠炎小鼠视网膜外核层并无显著变化但是与对照组相比,内核层显著变薄细胞排列较为松散。为了进一步明确结肠炎小鼠视网膜的结构变化,我们利用视网膜各层神经元的Marker进行免疫荧光染色。结果显示,肠炎小鼠的视网膜双极细胞严重受损,对照组小鼠的内核层胞体排列整齐紧密,而DSS组小鼠则出现明显的胞体丢失和纤维断裂,双极细胞两端连接RGC和感光细胞的突触也出现连接异常。同时,TUNEL染色发现视网膜节细胞出现凋亡,而由其轴突汇聚形成的视神经也出现明显的脱髓鞘现象。

随后,本课题探究了结肠炎引起的视网膜损伤中可能的免疫机制。结肠炎小鼠视网膜免疫微环境改变,促炎性细胞因子TNFaIL1bIFNgIL17a表达水平显著升高。此外,流式细胞术和免疫荧光染色都发现结肠炎小鼠视网膜出现CD4 + T细胞的明显浸润。接着我们对视网膜中最主要的行使免疫功能的细胞——小胶质细胞进行了研究,结果发现视网膜小胶质细胞增殖活化明显水平升高,遍布于整个内层视网膜。小胶质细胞不仅可以分泌细胞因子参与免疫损伤,或者直接发挥其吞噬作用清理受损细胞,还可以分泌趋化因子,促进其他免疫细胞,如CD4 + T细胞的募集。

Steaps蛋白家族在结肠和视网膜内都有着较高和稳定的表达。然而,在DSS诱导的结肠炎小鼠的结肠和视网膜中,Steap4基因均高表达,说明Steap4基因可能介导了结肠炎小鼠结肠与视网膜损伤的共同机制。并且,肠炎小鼠结肠中Steap4的高表达与巨噬细胞的增殖活化共定位,视网膜中Steap4的高表达与内层神经元损伤共定位,更加表明Steap4可能通过免疫调节方式介导结肠炎引发的视网膜病变。体外实验结果显示,细胞因子TNF-aIFN-g、和TGF-b能够刺激BV2细胞(小胶质细胞株)高表达Steap4基因。而Steap4基因高表达伴随着BV2细胞增殖活化能力的加强。相反,如果敲低Steap4基因,BV2细胞的增殖活化程度则明显降低。这说明Steap4的确能调节小胶质细胞的增殖活化。




预答辩评委:李涛(中山大学眼科中心 教授 博导) 鲁芳 何冲

答辩人:彭坤

报告时间:202037晚上七点

报告方式:视频答辩




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